α-氨基氮的测定
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下一篇 2008-03-09 11:02:36
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原理
茚三酮与麦芽汁中的α-氨基氮反应，得到还原茚三酮再与氨和未还原的茚三酮反应，生成蓝紫色络合物，其颜色深浅与α-氨基氮含量成正比。在波长570nrn下，测定吸光度，计算麦芽的α-氨基氮含量。
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仪器
a．可见分光光度计；
b．高精度恒温水浴：精度±0.1℃
c．试管：16mm×160mm
d．玻璃球：直径20～25mm
e．分析天平：感量0.1mg
f．移液管： 1、2、5ml
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试剂和溶液
a．发色剂
称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）10g、磷酸二氢钾（KH2PO4）6 g，茚三酮0.5g和果糖0.3 g，混匀，用水溶解并定容至100ml。将溶液贮于棕色瓶中，放入冰箱内保存。一周内使用有效。
b．稀释溶液
称取碘酸钾（KIO3）2g溶于600ml水中，加入96%（V/V）乙醇400ml于5℃贮存。
c．甘氨酸标准贮备液， l.072g／L
称取甘氨酸0.1072g用水溶解，并定容至100ml，于0℃贮存。
d．甘氨酸标准使用液
吸取甘氨酸标准贮备液lml，用水稀释至100ml，使用时现配。此标准使用液含游离氨基氮2g／L。
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分析步骤
4.1 样液的制备
吸取协定法糖化制备好的麦芽汁2ml，用水稀释至200ml。
4.2
测定
取9支试管并编号，于1，2，3号试管中分别放入样液2ml；4，5，6号管中分别放入蒸馏水2ml；7，8，9号管中分别放入甘氨酸标准使用液2ml。9支试管中各加入发色剂1ml，并分别放入一粒玻璃球于试管口上，将试管放入沸水浴中，准确加热16min，在20±0.1℃水浴中冷却20min。再各加入稀释液5ml，充分摇匀。用空白液管（4，5，6号管）调节仪器零点，于570nm波长下测量吸光度。测量应在30min内完成。
5计算
X10＝
式中：X10——麦芽汁中的α-氨基氮含量，mg/l；
A1——样液的平均吸光度；
A2——甘氨酸标准使用液的平均吸光度，
2 ——
甘氨酸标准使用液中α-氨基氮含量，mg/l；
n ——样液的稀释倍数。
X11＝
式中：X11——麦芽中α-氨基氮，mg／100g无水麦芽；
X10——麦芽汁中的α-氨基氮mg／l；
X2——同一样品麦芽的商品水分，g；
——同一样品麦芽汁（20℃时）的密度；
G——同一样品麦芽汁的浸出物，g。
6
结果的允许差
平行试验之差不大于7％。
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